在生物制品的生產(chǎn)過程中，宿主細胞DNA可能會殘留其中，這將會導致致癌基因或其他風險的遺傳物質(zhì)進入到最終的藥物制劑中。為了降低這種風險，監(jiān)管機構(gòu)規(guī)定了允許殘留的HCD限度，根據(jù)所使用的細胞系及給藥方案的不同，允許的HCD殘留范圍在10~100pg/劑量之間。關于HCD殘留的檢測，《中國藥典2025》通則3407中列出了三種方法，分別是DNA探針雜交法、熒光染色法，以及定量PCR法。而USP General Chapter <509>“Residual DNA Testing”章節(jié)中建議使用基于探針的DNA定量作為驗證方法，用于檢測在大腸桿菌（E. coli）或中國倉鼠卵巢（CHO）細胞系中生產(chǎn)的重組生物制品，以確保更好的靈敏度和準確性。在整個生產(chǎn)過程中，質(zhì)控人員需要對DNA水平進行評估，這些樣本可能含有其他雜質(zhì)和高濃度的藥物活性成分，因此必需一種可靠且靈敏的DNA定量方法。

2025版中國藥典新增多個單抗藥物的HCD檢測要求：注射用曲妥珠單抗、英夫利西單抗、阿達木單抗、貝伐珠單抗、利妥昔單抗等，以及部分疫苗類（如 Sabin 株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫<50pg每劑）均明確要求采用通則3407第三法（定量PCR法）進行檢測。同時新增 <人用抗體偶聯(lián)藥物制品總論>，抗體偶聯(lián)藥物（ADC）納入監(jiān)管，明確規(guī)定需要對外源性雜質(zhì)進行監(jiān)控。

Cygnus Technologies新推出的AccuRes?系列DNA定量試劑盒，專為用CHO、人或E. coli 細胞系重組表達生產(chǎn)的生物制品中HCD殘留檢測而設計。高濃度樣品可通過最小程度的稀釋后進行檢測，從而有效降低檢測限（LOD）。

Cygnus AccuRes?系列HCD檢測試劑盒的優(yōu)勢特點：

? 準確性—探針法qPCR保證了針對目標細胞系(如CHO, HEK,E. coli 等)HCD檢測的特異性，避免目標HCD的漏檢；

? 更好的精確度—CleanAmp® dNTPs與熱啟動Taq DNA聚合酶體系可有效降低PCR擴增過程中的非特異性啟動；

? 靈活性—兼容所有能檢測FAM熒光信號的qPCR設備，降低額外購置設備的成本

? All-in-one kit支持從樣品到qPCR的全過程—試劑盒中包含了DNA提取試劑（試管法或孔板法），AccuRes? PCR體系預混液，引物/探針預混液和DNA標準品

? 靈敏度—LOD為0.6 fg/μl。

Cygnus AccuRes?系列HCD檢測試劑盒操作流程

1. DNA提取

Cygnus的DNA提取方法采用了一種新型DNA carrier，能夠從痕量水平的殘留DNA中回收HCD，并在無蛋白質(zhì)、鹽和洗滌劑污染的環(huán)境中進行DNA檢測和定量。這比其他提取方法提高了DNA檢測和擴增的可重復性和穩(wěn)定性。

2. 擴增

Cygnus AccuRes? 系列試劑盒中采用高特異性引物/探針體系對目標HCD進行擴增。帶有FAM熒光標記的核酸探針在每一次PCR反應循環(huán)中被BHQ-1? 淬滅。先進的 CleanAmp® dNTPs與熱啟動Taq DNA聚合酶反應體系降低了非特異性擴增，進一步確保了qPCR擴增的特異性，靈敏度與穩(wěn)定性，同時qPCR體系的配置可以在室溫條件下操作。

3. 定量

試劑盒標準品的ct值構(gòu)建的標準曲線可將檢測結(jié)果計算為pg/10μl宿主細胞殘留DNA，進而可將HCD濃度換算為ng/mL, ng/mg或是ng/劑量?；谠摲椒?，殘留DNA最低可定量的濃度為0.6 fg/μL。

Cygnus AccuRes?系列HCD檢測試劑盒測試數(shù)據(jù)

準確性與可重復性測試。由兩名操作員（A和B）分別在兩天內(nèi)對已知DNA樣本進行兩次檢測，計算檢測結(jié)果的SD, CV和回收率%（見下表）。

完整的和不同程度降解的CHO DNA的提取與擴增效果對比。將完整的gDNA（Control）與分別用Alu1酶處理30min、1h、1.5h和2h后的DNA（Digested）凝膠電泳圖像。對照組和酶處理30min組樣品擴增的線性范圍基本一致（如下圖）。

存在外源DNA的情況下，CHO引物/探針仍具有廣泛的線性范圍和特異性。不同濃度的E. coli DNA不會影響CHO DNA的標準曲線（如下圖）。

過程樣品與藥物原液（DS）檢測結(jié)果對比。對比含有1 mg/mL陰離子交換或陽離子交換純化的蛋白樣品或藥物蛋白的CHO DNA回收率（見下表）。

Cygnus AccuRes?系列HCD檢測試劑盒訂購信息

即將上市：

Cygnus Technologies, LLC.為生物技術和生物制藥行業(yè)提供產(chǎn)品和分析方法，旨在加速研發(fā)階段和提高產(chǎn)品質(zhì)量。Cygnus開發(fā)和生產(chǎn)的生物工藝殘留試劑盒，用于檢測超過50種不同表達系統(tǒng)的特異性雜質(zhì)。Cygnus作為專注于生物技術應用免疫檢測的高靈敏度分析技術的專家，Cygnus的產(chǎn)品和服務已經(jīng)被幾乎所有主要的生物制藥公司使用超過25年。

北京西美杰科技有限公司作為Cygnus在中國總代理，與國內(nèi)眾多知名藥企，CRO/CMO企業(yè)建立了長久穩(wěn)定的合作關系。多年來西美杰的產(chǎn)品及服務幫助許多企業(yè)加速R&D階段，提高藥物質(zhì)量、純度和安全，加速優(yōu)化研發(fā)工藝，減少產(chǎn)品上市時間，降低QC成本。如您對上述產(chǎn)品感興趣，歡迎致電西美杰客服熱線400-050-4006或者登陸網(wǎng)站m.whuzsb.com了解更多信息。